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貼壁細(xì)胞培養(yǎng)的步驟有哪些?

更新時間:2023-10-11點擊次數(shù):1361

在動物細(xì)胞培養(yǎng)過程中,必須有可以貼附的支持物表面,其依靠自身分泌或培養(yǎng)基中的貼附因子才能在該表面生長增殖的離體動物的培養(yǎng)細(xì)胞。那么貼壁細(xì)胞培養(yǎng)的步驟有那些呢?讓我們一起來看看吧!

1. 將含有凍存細(xì)胞的安瓿放入37℃水浴中解凍。

2. 用70%乙醇對安瓿的頂端進(jìn)行消毒,打開安瓿,用吸管將細(xì)胞轉(zhuǎn)移到含有5ml起始培養(yǎng)基的25cm2組織培養(yǎng)瓶中,輕輕搖動培養(yǎng)瓶,使細(xì)胞均勻分布于培養(yǎng)瓶中,將其放入5%CO2加濕培養(yǎng)箱中37℃培養(yǎng)過夜。

3. 吸出起始培養(yǎng)基,換成適當(dāng)?shù)木S持培養(yǎng)基。將細(xì)胞放回CO2培養(yǎng)箱37℃培養(yǎng),每天檢查細(xì)胞是否生長至匯片。

4. 如果細(xì)胞生長至匯片,吸出培養(yǎng)基。

5. 用PBS或胰酶/EDTA清洗細(xì)胞,除去細(xì)胞上殘留的血清,將洗液吸出。

6. 用37℃、適當(dāng)體積的胰酶/EDTA剛好覆蓋單層細(xì)胞(如對于25cm2培養(yǎng)瓶需要0.3ml)。消化30~40s(細(xì)胞應(yīng)該分開),晃動培養(yǎng)瓶使細(xì)胞wan全分開。

7. 加入1.4ml適當(dāng)?shù)木S持培養(yǎng)基,用吸管來回吹打細(xì)胞懸液多次以打散細(xì)胞團(這些細(xì)胞用于傳代)。

8. 吸出0.5mL的細(xì)胞懸液,將其加入到新的含有30ml維持培養(yǎng)基的組織培養(yǎng)瓶中。輕輕搖動培養(yǎng)瓶,使細(xì)胞均勻分布于培養(yǎng)瓶中,將其放入CO2培養(yǎng)箱中37℃培養(yǎng)直到細(xì)胞生長至匯片(大約1周)。大約間隔一周用維持培養(yǎng)基進(jìn)行1:20稀釋傳代以維持細(xì)胞生長。

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